کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
7234845 | 1471012 | 2018 | 10 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Single-cell cloning enables the selection of more productive Drosophila melanogaster S2 cells for recombinant protein expression
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
PBSRS2RMCESingle-cell cloningOD600Sf9GMPSfMeGFPAMPPVDFFACSFBSBSA - BSADMSO - DMSObovine serum albumin - آلبومین سرم گاوSDS-PAGE - الکتروفورز ژل پلی آکریل آمیدsodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis - الکتروفورز ژل پلی اکریللید سدیم دودسیل سولفاتRecombinant protein expression - بیان پروتئین نوترکیبGood Manufacturing Practice - تمرین تولید خوبpolyvinylidene difluoride - دی فلوئورید پلی وینیلیدینDimethyl sulfoxide - دیمتیل سولفواکسیدfetal bovine serum - سرم جنین گاوserum free medium - سرم رایگان استfluorescence activated cell sorting - فلورسانس سلول فعال فعال سلولPhosphate-buffered saline - محلول نمک فسفات با خاصیت بافریpolymerase chain reaction - واکنش زنجیره ای پلیمرازPCR - واکنش زنجیرهٔ پلیمرازenhanced green fluorescent protein - پروتئین فلورسنت سبز افزایش یافته استInsect cell culture - کشت سلولی حشرات
موضوعات مرتبط
مهندسی و علوم پایه
مهندسی انرژی
انرژی های تجدید پذیر، توسعه پایدار و محیط زیست
پیش نمایش صفحه اول مقاله
چکیده انگلیسی
The generation of monoclonal cell lines is an important early process development step for recombinant protein production. Although single-cell cloning is an established method in mammalian cell lines, straightforward protocols are not yet available for insect cells. We describe a new method for the generation of monoclonal insect cells without using fetal bovine serum and/or feeder cells pretreated by irradiation or exposure to mitomycin. Highly productive clones of Drosophila melanogaster S2 cells were prepared in a two-step procedure, comprising the establishment of a polyclonal population and subsequent single cell isolation by limiting dilution. Necessary growth factors were provided by co-cultivation of single transformants with untransfected feeder cells, which were later removed by antibiotic selection. Enhanced expression of EGFP and two target peptides was confirmed by flow cytometry and dot/western blotting. Highly productive clones were stable, showed a uniform expression profile and typically a sixfold to tenfold increase in cell-specific productivity.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: Biotechnology Reports - Volume 19, September 2018, e00272
Journal: Biotechnology Reports - Volume 19, September 2018, e00272
نویسندگان
Jan Zitzmann, Christine Schreiber, Joel Eichmann, Roberto Otmar Bilz, Denise Salzig, Tobias Weidner, Peter Czermak,