Rapid antifungal susceptibility testing of fluconazole and amphotericin B by flow cytometry using FUN-1®: a preliminary study

ObjectiveThe increasing incidence of severe fungal infections and the difficulties encountered with the existing antifungal susceptibility testing methods led us to develop a new technique based on flow cytometry, using the fluorochrome FUN -1®.Materials and methodsWe tested the susceptibility of 14 Candida spp. strains (5 reference and 9 clinical strains) to amphotericin B and fluconazole by flow cytometry versus M27-A2 CLSI reference method. Fluorescence was measured with a FACScalibur® flow cytometer (Becton Dickinson). Amphotericin B susceptibility was studied on the 14 strains whereas fluconazole one was only performed on the five reference strains.ResultsResults were obtained after 30 min incubation for amphotericin B and 6 h for fluconazole. Reproducibility and repeatability tests have been performed on C. albicans ATCC 90028 and were > 95% and > 98%, respectively. The flow cytometry method resulted in clear-cut endpoints, which abolishes the source of variability of the M27-A2 reading. The results obtained showed that the patterns of susceptibility to amphotericin B were the same with the 2 methods used for all the strains. Our preliminary study with fluconazole gave the same results with the 5 control strains.ConclusionFUN-1® staining seems to be a rapid alternative to conventional methods to assess susceptibility of Candida spp. clinical isolates.

RésuméObjectifL'incidence croissante des infections fongiques et les difficultés rencontrées avec les techniques classiques d'évaluation de la sensibilité des levures aux antifongiques nous ont conduits à tester une technique originale d'antifongigramme, fondée sur la cytométrie en flux et l'utilisation du fluorochrome FUN-1®.Matériels et méthodesNous avons testé la sensibilité de 14 souches de Candida sp. (cinq souches de référence et neuf souches cliniques) à l'amphotéricine B et au fluconazole versus la méthode de référence M27-A2 du CLSI. La fluorescence a été mesurée avec un cytomètre en flux FACScalibur® (Becton Dickinson). La sensibilité à l'amphotéricine B a été étudiée sur les 14 souches de Candida sp. tandis que celle du fluconazole n'a été étudiée que sur les cinq souches de référence.RésultatsLes résultats sont obtenus après 30 minutes d'incubation pour l'amphotéricine B et après six heures pour le fluconazole. Les valeurs de reproductibilité et répétabilté ont été déterminées à l'aide de la souche de référence C. albicans ATCC 90028 et sont respectivement > 95 % et > 98 %. La technique cytométrique est une technique automatisée évitant ainsi la source d'erreur due à la lecture subjective de la méthode M27-A2. Les résultats obtenus montrent que les phénotypes de sensibilité à l'amphotéricine B sont identiques pour toutes les souches testées avec les deux techniques. Cette étude préliminaire avec le fluconazole conduit aux mêmes résultats.ConclusionLa cytométrie en flux avec marquage par FUN-1® semble être une alternative rapide aux méthodes conventionnelles pour déterminer la sensibilité de souches cliniques de Candida sp.