کد مقاله | کد نشریه | سال انتشار | مقاله انگلیسی | نسخه تمام متن |
---|---|---|---|---|
8327435 | 1540200 | 2018 | 45 صفحه PDF | دانلود رایگان |
عنوان انگلیسی مقاله ISI
Highly stable single-strand-specific 3â²-nuclease/nucleotidase from Legionella pneumophila
دانلود مقاله + سفارش ترجمه
دانلود مقاله ISI انگلیسی
رایگان برای ایرانیان
کلمات کلیدی
IEFsodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresisphosphate buffered saline with Tween 20NBS1LCV5′-AMPT2SSNi-NTAPBSTMWCOSECMALDI-TOFDTTPDBEDTA - اتیلن دی آمین تترا استیک اسید Ethylenediaminetetraacetic acid - اتیلینیدامین تتراستیک اسیدSDS-PAGE - الکتروفورز ژل پلی آکریل آمیدEscherichia coli expression - بیان اشرشیا کولیisoelectric focusing - تمرکز ذره ای الکتریکیmatrix-assisted laser desorption/ionization - جذب / یونیزاسیون لیزر ماتریس کمک می کندcircular dichroism - رنگ تابی دورانیType II secretion system - سیستم ترشحی Type IILegionella - لژیونلاLegionella pneumophila - لژیونلا پنوموفیلاMALDI - مالدیnickel-nitrilotriacetic acid - نیکل نیتریلوتوریکات اسیدMolecular Weight Cut Off - وزن مولکولی کاهش یافته استProtein Data Bank - پروتئین بانک اطلاعاتیSize exclusion chromatography - کروماتوگرافی اندازهای طردی
موضوعات مرتبط
علوم زیستی و بیوفناوری
بیوشیمی، ژنتیک و زیست شناسی مولکولی
زیست شیمی
پیش نمایش صفحه اول مقاله
چکیده انگلیسی
The Gram-negative bacterium Legionella pneumophila is one of the known opportunistic human pathogens with a gene coding for a zinc-dependent S1-P1 type nuclease. Bacterial zinc-dependent 3â²-nucleases/nucleotidases are little characterized and not fully understood, including L. pneumophila nuclease 1 (Lpn1), in contrast to many eukaryotic representatives with in-depth studies available. To help explain the principle properties and role of these enzymes in intracellular prokaryotic pathogens we have designed and optimized a heterologous expression protocol utilizing E. coli together with an efficient purification procedure, and performed detailed characterization of the enzyme. Replacement of Ni2+ ions by Zn2+ ions in affinity purification proved to be a crucial step in the production of pure and stable protein. The production protocol provides protein with high yield, purity, stability, and solubility for structure-function studies. We show that highly thermostable Lpn1 is active mainly towards RNA and ssDNA, with pH optima 7.0 and 6.0, respectively, with low activity towards dsDNA; the enzyme features pronounced substrate inhibition. Bioinformatic and experimental analysis, together with computer modeling and electrostatics calculations point to an unusually high positive charge on the enzyme surface under optimal conditions for catalysis. The results help explain the catalytic properties of Lpn1 and its substrate inhibition.
ناشر
Database: Elsevier - ScienceDirect (ساینس دایرکت)
Journal: International Journal of Biological Macromolecules - Volume 114, 15 July 2018, Pages 776-787
Journal: International Journal of Biological Macromolecules - Volume 114, 15 July 2018, Pages 776-787
نویسندگان
Mária Trundová, TomáÅ¡ Kovaľ, Raymond J. Owens, Karla Fejfarová, Jarmila DuÅ¡ková, Petr Kolenko, Jan Dohnálek,