دانلود مقالات ISI درباره الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید + ترجمه فارسی

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید(به انگلیسی: PAGE، polyacrylamide gel electrophoresis) تکنیکی است که به طور گسترده در بیوشیمی، پزشکی قانونی، ژنتیک، بیولوژی مولکولی و بیوتکنولوژی به منظور جداسازی ماکرومولکول‌هایی همچون پروتئین‌ها و اسیدهای نوکلئیک مورد استفاده قرار می‌گیرد. جداسازی ماکرومولکول‌ها بر اساس حرکت اللکتروفورتیک آنها انجام می‌گردد. میزان این حرکت به طول، کونفورماسیون و بار مولکول بستگی دارد. برخی مواقع ما از طریق این تکنیک ساختار طبیعی ماکرومولکول‌ها را بررسی می‌کنیم (Native PAGE). گاهی نیز به آن مواد شیمیایی دناتوره کنند ه می‌افزاییم تا درهم پیچیدگی‌ها و ساختار طبیعی از بین برود و مولکول‌ها تنها بر اساس طول و نسبت بارشان از یکدیگر جدا شوند. به این روش SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) گفته می‌شود. در این روش مولکول‌ها بر اساس تفاوت در وزن مولکولیشان از یکدیگر جدا می‌گردند. زمانی که این مولکول‌ها در میدان الکتریکی قرار می‌گیرند، رشته‌های پلی پپتیدی که بار منفی دارند، بر اساس میزان بارشان، به سمت آند حرکت می‌کنند. میزان فاصله پیموده شده، با وزن مولکولی آنها نسبت عکس دارد. با مقایسه نسبت فاصلهٔ طی شده پروتئین به طول ژل(Rf)، می‌توان به وزن مولکولی نسبی پروتئین دست یافت. به طور معمول به منظور دناتوره کردن اسیدهای نوکلئیک از اوره استفاده می‌شود. در حالی که به منظور دناتوره کردن پروتئین‌ها عموماً از سدیم دودسیل سولفات(SDS) استفاده می‌گردد. همچنین ممکن است از ۲-مرکاپتواتانل نیز جهت از بین بردن پیوندهای دی سولفیدی در بین کمپلکس‌های پروتئینی استفاده شود. محلولهای لازم در الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید 1ـ آکریل آمید 30%: برای تهیه 100 میلی‌لیتر از این محلول، gr 29 از پودر آکریل آمید را با gr1 از پودر بیس‌آکریل آمید مخلوط کرده و حجم آنرا با آب ‌مقطر به 100 میلی‌لیتر می‌رسانیم. 2ـ TBE5X: برای تهیه 1000 میلی‌لیتر از این محلول،gr54 از پودر Tris را با gr5/27 بوریک اسید مخلوط کرده و 20 میلی‌لیتر M)EDTA5/0( به آن اضافه می‌کنیم و با آب مقطر حجم محلول را به 1000 میلی‌لیتر می‌رسانیم. 3ـ آمونیوم پرسولفات 10%: برای تهیه 10 میلی‌لیتر از این محلول، gr1 از پودر APS را با آب مقطر به حجم 10 میلی‌لیتر می‌رسانیم. این محلول را بایستی در یخچال و در دمای C º 4 نگهداری کرد. 4ـ TEMED بصورت آماده وجود دارد که این محلول بسیار بد بو و جهش‌زا می‌باشد. بنابراین هنگام استفاده بایستی زیر هود کار شود و خیلی سریع کار انجام گیرد 5- بافر لود با حاوی فرم آمید: ml 10فرم آمید، μl200 EDTA M5/0 با PH 8، mg15 گزیلن سیانول و mg3 برومو فینول بلو را مخلوط می کنیم. وسایل لازم برای الکتروفورز: 1ـ‌ تانک 2ـ شیشه‌های ساخت ژل 3ـ شانه‌های مخصوص برای ایجاد چاهکهایی در ژل 4ـ گیره برای نگهداری شیشه‌های ژل 5ـ Spacer الکتروفورز: به سبب اینکه ماکرومولکول های زیستی مانند DNA و پروتئین ها باردار هستند می‌توان با قرار دادن آنها در یک میدان الکتریکی، آنها را بر اساس خواص فیزیکی مانند شکل فضایی، وزن مولکولی و بار الکتریکی، تفکیک کرد. برای این منظور از روشی بنام الکتروفورز استفاده می‌شود. روش های مختلف الکتروفورزی برای تفکیک و مطالعه بیومولکول ها اعم از اسید های نوکلئیک یا پروتئین ها ابداع شده است. ژل الکتروفورز: از یک محیط نیمه جامد (ژل) به عنوان فاز ثابت استفاده می‌شود. این نوع الکتروفورز برحسب نوع ژل به کار گرفته شده به دو نوع الکتروفورز ژل پلی‌اکریل آمید (PAGE) و الکتروفورز ژل آگارز تقسیم می‌شود. الکتروفورز PAGE دارای قدرت تفکیک بسیار بالائی بوده و برای تفکیک پروتئین ها و اسید های نوکلئیک به کار گرفته می‌شود. به منظور بررسی پروتئین ها با استفاده از PAGE، به سبب اینکه پروتئین ها دارای بارهای متفاوت هستند، معمولاً برای اینکه تفکیک فقط براساس وزن مولکولی انجام شود به بافر ماده شیمیائی SDS (سدیم دو دسیل سولفات ) اضافه می‌شود. SDS مولکول بزرگی با بار منفی می‌باشد. این ماده باعث واسرشت شدن پروتئین ها شده و به آنها متصل می‌شود. به ازای هر دو اسید آمینه، یک مولکول SDS به پروتئین متصل می‌شود که باعث القاء بارمنفی متناسب با وزن مولکولی به پروتئین می‌شود. هر چه غلظت پلی اکریل آمید بیشتر باشد قدرت تفکیک ژل بیشتر خواهد بود و مولکول های دارای وزن مولکولی نزدیک به هم را بهتر تفکیک می‌نماید. برای تفکیک اسیدهای نوکلئیک در صورت امکان از ژل آگارز استفاده می‌شود. تهیه ژل مزبور به مراتب سریعتر وآسانتر از ژل پلی اکریل آمید بوده و هزینه کمتری را در بر می‌گیرد.