آشنایی با موضوع
PCR در زمان واقعی (Real Time PCR) تکنیکی برای مشاهده بی وقفه پیشرفت واکنش PCR در طول زمان می باشد. PCR مخفف عبارت Polymerase Chain Reaction به معنی واکنش زنجیرهٔ پلیمراز تکنیکی در زیست شناسی مولکولی است و به منظور تکثیر یک نسخه منفرد یا نسخه های کمی از یک قطعه DNA با توالی خاص به تعداد هزار یا میلیون ها نسخه به کار می رود. این تکنیک ابزاری آسان و ارزان قیمت برای تکثیر یک قطعه خاص از DNA است و برای اهدافی همچون تشخیص و نظارت بر بیماری های ژنتیکی، شناسایی مجرمان (در زمینه پزشکی قانونی) و مطالعه عملکرد یک بخش هدف از DNA مورد استفاده قرار می گیرد.
در این روش از کاوشگرها یا پروبهای هیبریداسیون نشاندار شده با رنگهای فلورسانس در انتهای'5 یا'3استفاده میشود، که امکان بررسی میزان محصول PCR را بدون جداسازی آنها در روشهای الکتروفورز در ژل آگاروز یا ژل پلی آکریل آمید میدهد. این سیستم در سال 1992 کشف شد. این روش به دلیل کاهش زمان سیکلهای PCR، حذف مرحله Post-PCR و کاربرد نشانگرهای فلوروژنیک و روشهای حساس آشکارسازی تابش آنها باعث افزایش سرعت این سیستم نسبت به سیستم PCR معمولی شده است. اگرچه این روش دارای معایبی نیز هست.
وجه افتراق Real Time PCR با PCR نوع معمولی به کار گرفتن یک نشانگر فلورسنت در واکنش جهت ردیابی محصول واکنش می باشد. این گزارشگرها به گونهای طراحی میشوند که در صورت تکثیر DNA نور تولید کنند. لذا افزایش شدت نور ثبت شده در دستگاه با میزان محصول بدست آمده نسبت مستقیم دارد. به اولین چرخهای که شدت فلورسنت بیشتر از خط پایه (Threshold)باشد چرخۀ آستانه یا CT گویند. عدد CT با مقدار الگوی اولیه رابطۀ معنی داری دارد و از روی آن میتوان مقدار mRNA اولیه را تخمین زد. به عبارت دیگر در فاز اولیه مرحله تصاعدی مقدار فلورسنت افزایش می یابد تا به آستانهای می رسد که به مقدارمشخصی از سطح background بالاتر است، این چرخه (سیکلی از PCR که قطعه تکثیر از حد آستانه عبور می کند) به عنوان CT شناخته می شود.
در روشReal time PCRواکنش بصورت تک مرحله ای ویا 2 مرحله ای انجام می شود. در یک مرحله ای از سنتز cDNA و تکثیر آن در یک تیوب انجام می شود. در واکنش 2مرحله ای نسخه برداری معکوس و تکثیر در تیوب های جداگانه صورت می گیرد. در تکمرحله ای تغییرات آزمایشگاهی به حداقل می رسد ولی حساسیت کمتری دارد. در روش 2مرحله ای هم امکان سنجش قسمت های مختلف یک DNA هدف وجود دارد.
در این صفحه تعداد 387 مقاله تخصصی درباره PCR در زمان واقعی که در نشریه های معتبر علمی و پایگاه ساینس دایرکت (Science Direct) منتشر شده، نمایش داده شده است. برخی از این مقالات، پیش تر به زبان فارسی ترجمه شده اند که با مراجعه به هر یک از آنها، می توانید متن کامل مقاله انگلیسی همراه با ترجمه فارسی آن را دریافت فرمایید.
در صورتی که مقاله مورد نظر شما هنوز به فارسی ترجمه نشده باشد، مترجمان با تجربه ما آمادگی دارند آن را در اسرع وقت برای شما ترجمه نمایند.
در صورتی که مقاله مورد نظر شما هنوز به فارسی ترجمه نشده باشد، مترجمان با تجربه ما آمادگی دارند آن را در اسرع وقت برای شما ترجمه نمایند.